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BCA 蛋白浓度测定试剂盒
  • 产品货号:
    DEM109
  • 中文名称:
    BCA 蛋白浓度测定试剂盒
  • 品牌:
    BIODEE
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • DEM109-500T

    500T

    ¥510.00

产品描述

产品简介 

   BCA 蛋白定量检测试剂盒,是一种灵敏并且抗干扰能力强的蛋白定量检测试剂盒。蛋白质在碱性条件下能够将 Cu2+还原为 Cu+,BCA (Bicinchoninic acid)与 Cu+螯合形成紫蓝色螯合物,通过测定螯合产物在562nm 的吸光度值,即可对蛋白浓度进行定量。

   BCA 蛋白定量方法对去垢剂耐受能力强,SDS, Triton X-100, Tween-20 等去垢剂,只要浓度低于 5%,即对蛋白浓度测定无明显影响。特别适合用于 RIPA 裂解液提取的细胞和组织蛋白样品中的蛋白浓度测定。

   本试剂盒方便快捷,加入待测样品 1 小时即可进行吸光度测定,对蛋白定量线性范围在 31.2-1000μg/ml之间,灵敏度≤31.2μg/ml。

试剂盒组成

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需要而未提供的试剂及器材 

1. 超纯水

2. 细胞培养用 PBS 或 RIPA 裂解液

3. 系列可调节量程移液器及吸头

4. 干净的试管、离心管及 96 孔板

5. 酶标仪

储存条件 

    蛋白标准品置于-20℃储存,其它部分 4℃储存,保质期 12 个月。

注意事项 

  1. 本试剂盒涉及氧化还原反应,很多氧化剂和还原剂都会干扰试剂盒的测定,特别是带巯基的试剂会干扰本试剂盒的测定,请尽量避免使用。

  2. 本试剂盒涉及金属离子的螯合反应,避免使用 EDTA 等螯合剂处理样品,如果使用,请保持浓度≤0.5 mM。

  3. 每次测定时利用标准品制作标准曲线。

  4. 初次使用试剂盒时,小体积液体试剂请适当离心后使用。

  5. 本产品仅限专业人员用于科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。

  6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明 

1. 样品的准备 

1.1 细胞样品的准备:收集适量新鲜细胞,PBS 洗涤细胞一次,离心收集细胞,吸尽上清。加入 400 μl 冰冷 PBS 匀浆裂解或利用中等强     度 RIPA 裂解液冰浴裂解。4℃,10000g 离心 10 分钟。取上清用于蛋白浓度测定。不立即测定的样品可以-20℃及其以下温度保存。

1.2 组织样品的准备:取约 20 mg 组织,加入 1 ml 的冰冷 PBS 或中等强度 RIPA 裂解液,用匀浆器冰浴匀浆。 4℃,10000g 离心 10       分钟。取上清用于蛋白浓度测定。不立即测定的样品可以-20℃及其以下温度保存。如果样品中蛋白浓度超出测定范围,可利用 PBS 或     RIPA 裂解液适当稀释后测定,稀释倍数请通过预实验确定。

1.3 血清、血浆、唾液或尿液样品的准备:血清、血浆、唾液或尿液样品,都可以利用纯水适当稀释后直接用于测定。不立即测定的样品可     以-20℃及其以下温度保存。

2. 试剂盒的准备 

    BCA 蛋白定量检测工作液的配制:按下表比例取 BCA 溶液和 Cu2+溶液配制 BCA 蛋白定量检测工作液。

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3. 标准品的准备 

  利用制备样品的溶剂(PBS 或 RIPA 裂解液等)将部分 10 mg/ml 蛋白标准品稀释到 1000μg/ml,然后再倍倍稀释成 500、250、125、62.5、31.2 μg/ml 等浓度梯度,用于标准曲线测定。每次测定前重新配置标准品系列稀释液。

测定方法

  1. 参考下表,使用 96 孔板,依次加入 BCA 蛋白定量检测工作液、标准品或样品后,混匀,37℃孵育 1小时。

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注:如果将孵育温度提高到 60℃,可以缩短反应时间。

2. 孵育结束后,利用酶标仪测定 A562nm。如果样品吸光度超过最高浓度标准品吸光度值,可适当稀释样品后测定,如果样品吸光度过低,可适当冷冻干燥浓缩样品后测定。

数据处理

利用标准品浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标制作 BCA 蛋白浓度检测标准曲线,并获得横纵坐标之间的函数关系式,然后利用标曲和各样品的吸光度值计算样品中蛋白浓度。 蛋白浓度标曲如下图所示:

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