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ELISA实验指南(样本制备和常见问题)

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。通常可适用于测定细胞培养上清、血清、血浆以及组织裂解物样品等。


ELISA样本制备指南

指南各种制备方法适用于常规ELISA,样品的制备方法通常也会随测定靶标和检测方法而适当变化,在建立新的检测方法时,建议查阅相关文献或进行必要的流程优化。

在收集样品前有必要建立完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定,我们提倡新鲜样品尽早检测,对收集后当天就进行检测的标本及时储存在4℃备用。如有特殊原因需要周期性收集样品,在造模取材后,将标本及时分装后放在-20℃或-80℃条件下保存。因冰箱与室温存在一定温差,蛋白极易降解,直接影响实验质量,所以避免反复冻融。


液体类型样品

【细胞培养上清】

将细胞培养基移至离心管,并在4℃条件下以1,500 rpm离心

10min。立即等分上清液并于-80℃下保存样品。尽可能减少样品冻融。


【血清】

室温血液自然凝固10~20min后,4℃条件下以3,000 rpm离心10min。立即等分上清液并于-80℃下保存样品。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。避免反复冻融样品。


【血浆】

将全血收集到含抗凝血剂的管中,根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,在4℃条件下以3,000 rpm离心10分钟。立即等分上清液(血浆)并于-80℃下保存样品,避免反复冻融样品。


【唾液】

收集样品并在4℃下以10,000 x g离心2分钟。

立即等分上清液并在-80℃下保存样品,避免反复冻融样品。


【尿液】

用无菌管收集,并在 4℃下以10,000 x g离心2分钟。

立即等分上清液并于-80℃下保存样品。避免反复冻融样品。


组织样品

采集组织(最好在冰上操作,并应尽可能快以防止被蛋白酶降解

)样品后,称取组织净重,用液氮迅速冷冻保存备用。将样品保存在- 80℃下以便后续使用或放置在冰上进行直接匀浆。加入一定量的组织提取缓冲液,用手工或匀浆器将样品匀浆充分。


在4℃下以13000 rpm离心20分钟。置于冰上,将上清液(可溶的蛋白质提取物)等分至新的冷却管中并在-80℃下保存样品。避免反复冻融样品。


ELISA常见问题解答


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