kok最新平台

最近搜索:细胞培养 微生物学 分子生物 生物化学
kok最新平台>>植物学>>抗生素>>金担子素A溶液(1mg/ml)
金担子素A溶液(1mg/ml)
  • 产品货号:
    BN20583
  • 中文名称:
    金担子素A溶液(1mg/ml)
  • 品牌:
    Biorigin
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • BN20583-1ml

    1ml

    ¥1500.00

  • BN20583-1mlx5

    1mlx5

    ¥6000.00

产品描述

image.png

保存:4℃保存。

产品说明: 

     金担子素 A(Aureobasidin A,AbA)是从丝状真菌 Aureobasidium pullulans No. R106 中 分离出来的环酯肽类抗生素,具有很强的抗真菌能力。在较低的浓度下(0.1-0.5μg/ml)即可 对酵母产生毒性。对其敏感的真菌种类包括:出牙酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒 裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、构巢曲霉 (Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A. niger.)。作用机制在于 AbA 抑制了真菌生长所依赖 的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide,IPC)合成酶的活性,干扰鞘脂合成,从而进一 步杀死菌株。编码 IPC 合成酶的基因研究较多的有来自酿酒酵母菌的 AUR1 基因,以及构 巢曲霉的 AURA 基因,两者具有同源性。通过对这些编码基因进行突变即可使得菌株对 AbA  产生抗性,如 AUR1-C 基因。

     AbA 非常适合用作阳性克隆子筛选用的药物选择性标记。AbA 抗性也是酵母单/双杂交研 究中理想的报告子。本品为溶于甲醇的 AbA 溶液,浓度为 1 mg/ml。具体的工作浓度取决于 宿主细胞的敏感度(见表 1.AbA 对各种酵母菌的最低抑菌浓度(MIC))。

image.png

产品性质: 

分子式(Formula):C60H92N8O11 

分子量(Molecular weight):1100 

纯度(Purity):≥95% 

熔点(Melting point):155-157℃ 

结构式(Structure):image.png

操作步骤(抗 AbA 的酵母转化系统): 

1. 加入 0.5 ml 过夜培养的酵母到 50 ml YPD 培养基中(配方:1L 液体培养基含有 10g  yeast extract,20g polypeptone,20g D-glucose;固体培养基另外加入 2%琼脂)。 

2. 30℃培养约 6 小时,测定 OD660 为 1~2。使用二倍体时,测定 OD660 为 2~4。 

3. 1,000×g 离心 5 分钟。 

4. 用 10 ml Solution A(配方:100 mM Lithium acetate,10 mM Tris-HCl pH 7.5,1 mM EDTA) 悬浮沉淀,1,000×g 离心 5 分钟。 

5. 用 Solution A 重悬沉淀,直到 OD660 为 150。 

6. 在管内分取 100µl 细胞悬浮液,30℃培养 1 小时。 

7. 加入 5µg 载体(环状或线性 DNA)和 150µg Carrier DNA(已经过 100℃加热 10 分钟, 并迅速冷却)。 

   注意:pAUR101 需使用线性 DNA 进行转化。使用环状 DNA 会降低转化效率甚至转化不成 功。pAUR112 和 pAUR123 需使用完整的质粒 DNA 进行转化。

8. 加入 850 µl Solution B(配方:取 40 g Polyethylene Glycol 4000 溶于 100 ml Solution A  充分溶解,需要现用现配),轻轻混匀。 

9. 30℃培养 30 分钟后,42℃培养 15 分钟。 

10. 室温放置 10 分钟。 

11. 5,000 rpm 离心 1 分钟,用 5 ml YPD 培养基悬浮沉淀。 

12. 30℃培养 6 小时~过夜。 

13. 5,000~10,000 rpm 离心,用 1-10 ml 0.9% NaCl 悬浮沉淀。

14. 在 YPD 选择培养基平板(含有一定浓度的 AbA,依菌株类型而定)上接种 100 µl 细胞 悬液。30℃培养 3-4 天后转化完成。 

15. 挑取阳性转化子,和/或测定转化效率(以每微克质粒 DNA 转化的菌落数来表示)。

注意事项: 

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 

2. AbA 的最佳工作浓度因宿主细胞不同而有差异,可根据最低抑菌浓度(MIC)来确定。